Acta Univ. Agric. Silvic. Mendelianae Brun. 2004, 52(4), 169-176 | DOI: 10.11118/actaun200452040169
Metodika výroby mikroskopických preparátů ze vzorků dřeva
- Ústav nauky o dřevě, Mendelova zemědělská a lesnická univerzita v Brně, Zemědělská 3, 613 00 Brno, Česká republika
Byly vyzkoušeny stávající postupy výroby trvalých mikroskopických preparátů dřeva. Výsledkem je zrychlení procesu výroby trvalých preparátů při zachování vysoké kvality. Dokladem jsou trvalé preparáty domácích i tropických dřev, které byly zhotoveny v rámci projektů FRVŠ 65/2002 - Anatomická stavba dřeva - multimediální výukové texty, FRVŠ 1328/2003 - Lexikon vybraných tropických dřev a Grantové agentury České republiky - Současný stav a trendy vývoje lesů v kulturní krajině (526/03/H036). Digitalizované mikroskopické preparáty z těchto projektů lze najít na http://www.ldf.mendelu.cz/ldf/ustavy/naukadreva/Projects/. Práce byla realizována za podpory Grantové agentury České republiky - Současný stav a trendy vývoje lesů v kulturní krajině (526/03/H036).
Nejlépe se osvědčila následující metodika výroby trvalých mikroskopických preparátů barvených safraninem:
1. Příprava vzorků
Z požadovaných vzorků dřev nařežeme tělíska ve tvaru hranolů s přesně orientovanými základními řezy, přibližně 10 × 10 × 20 mm. Rozměry tělísek jsou limitovány jednak držákem vzorků konkrétního mikrotomu a také reálnou možností vyrobit mikrořezy příslušných rozměrů.
2. Měkčení vzorků
Měkká dřeva s absolutní vlhkostí dřeva nad 80 % můžeme přímo krájet. Ostatní vzorky dřev musíme vařit v 10% roztoku glycerinu ve vodě. Doba vaření: 3-8 dní.
3. Krájení na mikrotomu
Na mikrotomu zhotovíme tři základní řezy. Pokud je krájení problematické, je vzorek pravděpodobně málo změkčený a musíme měkčení opakovat.
4. Barvení mikrořezů
Mikrořezy ponecháme 5 minut v safraninu.
5. Odvodňování mikrořezů
a) Mikrořezy uložíme do 96% etanolu (10 min),
b) přeneseme do karbol-xylolu (1:3) (3 min),
c) přeneseme do xylolu (3 min).
6. Uzavírání
Odvodněné řezy položíme na očištěné podložní sklo, kápneme na ně přiměřené množství kanadského balzámu, který opatrně rozetřeme po celém mikrořezu. Pomalu přikládáme krycí sklo. Takto vyrobený trvalý mikroskopický preparát zatížíme uprostřed krycího skla např. pryžovou zátkou po dobu jednoho dne. Preparáty zakryjeme, aby se na ně neprášilo a necháme zaschnout dva týdny.
7. Označení
Každý preparát opatříme štítkem s popisem.
dřevo, mikrořezy, mikroskopické praparáty, metody
The methodology of making microscopical preparations of wood
In this paper, there are discussed methods of making woody tissues microscopical preparations and making its microslides. There are described common methods of preparation of wood blocks, sectioning of woody tissues, staining and mounting. The differences of making wood sections and non-lignified plant sections are highlighted. The authors recommendate the fast methodology of making quality microslides of wood sections based on their own experiences.
Keywords: wood, microslides, microscopical preparations, methods
Received: April 5, 2004; Published: June 7, 2015 Show citation
References
- Austral Scientific. Disposable tungsten carbide microtome blades and holder for paraffin and frozen sectioning. Canberra ACT; Austral Scientific. 1986
- Diatome. The diamond knife for light microscopy. Diatome Ltd. Switzerland. 1987
- FRANKLIN, G. L.: Preparation of thin sections of synthetic resins and wood-resin composites and a new macerating method for wood. Nature 1945, 155, s.51 DOI: 10.1038/155051a0
Go to original source... - Glen Creston. Glen Creston microtome knives. Glen Creston Ltd. Stanmore, Middlesex, U.K. 1985
- HOADLEY, R. B.: Identifying wood. Newtown, 1990, 223 s.
- HORÁČEK, P., ŠLEZINGEROVÁ, J., GANDELOVÁ, L.: Effects of environment on the xylogenesis of Norway spruce (Picea abies /L./ Karst.) In: WIMMER, R., VETTER, R. E. (eds.): Tree ring analysis: biological methodological, and environmental aspects. CABI International, University Press, Cambridge, 1999, 33-53.
- IVES, E.: A Guide to Wood Microtomy; Making quality microslides of wood sections. Suffolk Offset Martlesham Suffolk, 2001. 114 s.
- KISSER, J.: Mikrotomie des Holzes. In: Freund, H.: Handbuch der Mikroskopie in der Technik. Frankfurt, 1970.
- NĚMEC, B.: Botanická mikrotechnika. ČSAV Praha, 1962, 482 s.
- PANSHIN, A. J.; DE ZEEUW, C. Textbook of wood technology. 4.ed. New York: Mc-Graw-Hill, 1980.
- PAZOURKOVÁ, Z., PAZOUREK, J.: Nová modifikace nigrosinové methody. Preslia, 1955, 27, s. 442-446
- PAZOURKOVÁ, Z.: Botanická mikrotechnika. Skriptum. Univerzita Karlova, Praha, 1986, 166 s.
- POŽGAJ, A., CHOVANEC, D., KURJATKO, S., BABIAK, M.: Štruktúra a vlastnosti dreva. Príroda, a.s., Bratislava, 1997, 488 s.
- SIGMUND, F.: Anatomie der Phanerogamen. Franckh'sche Verlagshandlung, Stuttgart, 1915
- STRASBURGER, E.: Lehrbuch der Botanik für Hochschulen., verl. von Gustav Fisher, Jena, 1910 Go to original source...
- VAVRČÍK, H.: Využití fluorescenční mikroskopie při detekci ligninu ve zdřevnatělé buněčné stěně dřeva smrku. Acta Universitatis Agriculturae et Silviculturae Mendelianae Brunensis, 2002, 5, p. 21-29, ISSN 1211-8516.
- WAGENFÜHR, R.: Holz. Anatomie - Chemie - Physik. Anatomie des Holzes. DRW-Verlag Weinbrenner GmbH & Co., 1999, 188 s.
This is an open access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International License (CC BY NC ND 4.0), which permits non-comercial use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original publication is properly cited. No use, distribution or reproduction is permitted which does not comply with these terms.